CRISPR
CRISPR/Cas9基因编辑工具介绍
规律间隔成簇短回文(wen)重复(fu)序列（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats, CRISPR）本身是(shi)一(yi)种防御(yu)系统，用以保护细(xi)菌(jun)和古(gu)细(xi)菌(jun)细(xi)胞不(bu)受(shou)病(bing)毒的(de)(de)侵害。在这(zhei)些(xie)生物基(ji)因(yin)组(zu)中的(de)(de)CRISPR位点能(neng)表达(da)与入侵病(bing)毒基(ji)因(yin)组(zu)序列相匹(pi)配的(de)(de)小分子RNA 。当(dang)微生物感(gan)染了这(zhei)些(xie)病(bing)毒中的(de)(de)一(yi)种，CRISPR RNA就能(neng)通过(guo)互补序列结(jie)合病(bing)毒基(ji)因(yin)组(zu)，并表达(da)CRISPR相关酶(mei)(mei)，也(ye)就是(shi)Cas，这(zhei)些(xie)酶(mei)(mei)都是(shi)核酸酶(mei)(mei)，能(neng)切割病(bing)毒DNA ，阻止病(bing)毒完成其功能(neng)。
Cas9酶受sgRNA引导靶向切割DNA双链的分子机制
该切割DNA的(de)机制(zhi)(zhi)与(yu)2012年(nian)被证实广(guang)泛适用于(yu)真核生(sheng)物，从而引发(fa)了后续的(de)以(yi)(yi)(yi)(yi)(yi)CRISPR/Cas9为基(ji)(ji)(ji)础(chu)的(de)第三代基(ji)(ji)(ji)因(yin)编(bian)(bian)辑工具(ju)的(de)研究热潮。在(zai)真核细胞中(zhong)双链的(de)DNA打(da)断(duan)（Double strand break, DSB）可(ke)(ke)以(yi)(yi)(yi)(yi)(yi)引发(fa)两(liang)种修(xiu)复(fu)机制(zhi)(zhi)，其中(zhong)非同(tong)源(yuan)末(mo)端结合（Non-homologous end joining, NHEJ）可(ke)(ke)以(yi)(yi)(yi)(yi)(yi)产生(sheng)数个碱基(ji)(ji)(ji)的(de)随(sui)机删除或插(cha)入，从而引发(fa)移码突变，这便是基(ji)(ji)(ji)因(yin)编(bian)(bian)辑工具(ju)进行(xing)基(ji)(ji)(ji)因(yin)敲除的(de)原理；此外在(zai)有(you)同(tong)源(yuan)序列存在(zai)时可(ke)(ke)以(yi)(yi)(yi)(yi)(yi)进行(xing)同(tong)源(yuan)重(zhong)组修(xiu)复(fu)，该机制(zhi)(zhi)可(ke)(ke)以(yi)(yi)(yi)(yi)(yi)实现外源(yuan)基(ji)(ji)(ji)因(yin)的(de)敲入或者定点修(xiu)饰。
CRISPR/Cas9技术特点
相比前两代基因编辑工具ZFN系统和TALEN系统，其优点显著：
首先，CRISPR-Cas9系统的(de)可用(yong)位(wei)置更多(duo)。理论上基因组(zu)中每8个(ge)碱基就能(neng)找(zhao)到(dao)一个(ge)可以(yi)用(yong)CRISPR-Cas9进行编辑的(de)位(wei)置，可以(yi)说这一技术能(neng)对任一基因进行操作，而TALEN和ZFN系统则在数百(bai)甚至上千(qian)个(ge)碱基中才能(neng)找(zhao)到(dao)一个(ge)可用(yong)位(wei)点，这大大限制了使用(yong)范围。
其(qi)(qi)次，Cas9扩展性强，正如本公司使用的(de)Cas9n，是一种只进行单链切割的(de)Cas9突变型，该(gai)酶可以(yi)大大降低切开双链后带来(lai)的(de)非同源末端(duan)连接造(zao)成的(de)染色体(ti)变异风险(xian)。此外(wai)还可以(yi)将Cas9蛋(dan)(dan)白(bai)连接其(qi)(qi)他功能蛋(dan)(dan)白(bai)，来(lai)在(zai)特定DNA序列上研(yan)究(jiu)这些(xie)蛋(dan)(dan)白(bai)对细胞的(de)影响(xiang)。
第三，更为(wei)重要的(de)是，CRISPR-Cas9系统的(de)使(shi)用极(ji)为(wei)方便，只(zhi)需要替换一段核酸序列，几乎任何(he)实(shi)验室都可以开(kai)展(zhan)工作(zuo)。
中科生物CRISPR/Cas9载体构建服务优势
1.本公司提(ti)供的(de)质(zhi)粒均来源于(yu)最新的(de)顶尖杂志(zhi)中已使用过的(de)系统，其有效性(xing)已被(bei)反复被(bei)验证。
2.靶(ba)点(dian)的筛选: 不同靶(ba)点(dian)的有效性(xing)存在差异(yi)，本公司(si)免(mian)费为您设计三个特(te)异(yi)性(xing)靶(ba)点(dian)。
3.载体(ti)系(xi)(xi)(xi)统(tong)的构建：腺病(bing)毒CRISPR系(xi)(xi)(xi)统(tong)、双(shuang)切口CRISPR系(xi)(xi)(xi)统(tong)、lentiCRISPR系(xi)(xi)(xi)统(tong)、常规CRISPR系(xi)(xi)(xi)统(tong)等，根(gen)据客(ke)户(hu)的不同需要，提供个性化(hua)载体(ti)构建服(fu)务。
